A utilização destes indicadores permite a comprovação da eficiência da esterilização, uma vez que o crescimento de microrganismos após a aplicação do processo é diretamente testado.
Este indicador consiste em uma preparação padronizada de esporos bacterianos em suspensões que contém em torno de 106esporos por unidade de papel.
Os microrganismos utilizados são de acordo com o processo de esterilização avaliado (APECIH, 1998):
- autoclave a vapor: B. stearothermophilus;
- calor seco: B. subtilis var. niger;
- autoclave a óxido de etileno: B. subtilis var. niger;
- plasma de peróxido de hidrogênio: B. subtilis var. niger;
- radiação gama: Bacillus pumilus;
Após o processamento dos indicadores, eles devem ser incubados para se verificar se as cepas ainda são viáveis. As condições de incubação e o meio em que os indicadores devem ser incubados devem ser fornecidas pelo fabricante das preparações. O indicador que fora processado é incubado nas mesmas condições e juntamente com um outro que não tenha passado pelo processo de esterilização a fim de se verificar a viabilidade das cepas e as condições adequadas de incubação que favoreçam o crescimento bacteriano.
A realização de testes biológicos deve ser, no mínimo, semanalmente e após cada manutenção ou suspeita de mau funcionamento.
No processo de esterilização a óxido de etileno o teste deve ser realizado em cada ciclo de esterilização devido a complexidade do processo e a maior probabilidade de falhas.