Questão 1720921

• Banca: FGV
• Órgão: FIOCRUZ
• Ano: 2010
• Provas: FGV - 2010 - FIOCRUZ - Tecnologista em Saúde - Desenvolvimento de Vacinas Bacterianas
• Disciplina: Biologia
• Assuntos: Moléculas, células e tecidos

A eletroforese é uma técnica usada em bioquímica, genética e biologia molecular para separar moléculas de acordo com seu tamanho ou carga. Com relação à técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida com duodecil sulfato de sódio (SDSPAGE), assinale a afirmativa incorreta.

• A. É utilizada para separação de proteínas de acordo com seu tamanho. Proteínas pequenas vão passar mais facilmente pela malha do gel, enquanto proteínas maiores vão ter mais dificuldade.
• B. O duodecil sulfato de sódio (SDS) é um detergente aniônico que desnatura estruturas secundárias e estruturas terciárias não mantidas por pontes dissulfeto e aplica uma carga negativa em cada proteína de acordo com sua massa.
• C. As proteínas desnaturadas são aplicadas nos poços do gel de empilhamento ou stacking e submergidas em um tampão específico. Uma corrente elétrica é aplicada através do gel, levando à migração das proteínas carregadas negativamente em direção ao catodo.
• D. Independentemente do sistema, a preparação da técnica requer a polimerização entre duas placas de vidro, de duas camadas diferentes de poliacrilamida.
• E. Além de SDS, as proteínas podem ser previamente aquecidas a quase sua ebulição na presença de um agente redutor, como o Persulfato de amônio ou o betamercaptoetanol (BME).

Gabarito: E

Comentários

• Verifique os reagentes utilizados para polimerizar a acrilamida. Um gel de poliacrilamida é formado por polimerização de uma mistura líquida, que consiste em bis-acrilamida e acrilamida. Persulfato de amônio e TEMED são adicionados à acrilamida, para catalisar a formação do gel. Tipicamente, a acrilamida deve mostrar sinais de polimerização (formação de gel) 15 minutos após o persulfato de amônio e o TEMED forem adicionados. Polimerização que ocorre muito rapidamente é o resultado de grandes quantidades de persulfato de amônio. Quando em quantidade insuficiente, pode causar a polimerização incompleta ou desigual.

• Persulfato de amônio não é agente redutor!!!! o Persulfato de amônio é utilizado para a polimerização de géis de poliacrilamida, liberando radicais livres no meio que darão origem à polimerização. Esse processo é catalisado pelo TEMED

• A letra C também não está correta.

  Se as proteínas são carregadas negativamente, elas migram do catodo para o anodo. O anodo é o polo positivo.

  Se eu estiver enganado, favor me corrijam.

• Como as proteínas são carregadas NEGATIVAMENTE e vão em direção ao CÁTODO (negativo) ?