Questão 1952425

• Banca: IADES
• Órgão: PC-DF
• Ano: 2016
• Provas: IADES - 2016 - PC-DF - Perito Criminal - Ciências Biológicas
• Disciplina: Biologia
• Assuntos: Moléculas, células e tecidos

Acerca da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a alternativa correta.

• A. Três ciclos de reação produzem oito cópias da sequência alvo de DNA, quatro das quais possuem os mesmos comprimentos e correspondem exatamente a uma ou outra fita da sequência original. As outras fitas contêm DNA extra que está além da sequência original, replicado nos primeiros ciclos.
• B. O molde original para a reação de PCR pode ser tanto DNA ou RNA, de modo que tanto uma cópia de DNA genômico quanto um cDNA pode ser obtido por PCR.
• C. A técnica de PCR vem sendo atualmente substituída pela utilização de anticorpos contra proteínas da capa viral para detectar a presença de infecções virais em amostras humanas, devido ao fato de esta última compreender um método de detecção mais sensível.
• D. A amplificação de qualquer sequência de DNA pela técnica de PCR requer que as amostras biológicas estejam bastante preservadas, inviabilizando a realização do teste em amostras muito antigas, como fósseis.
• E. A PCR é uma técnica muito sensível e tem diversas aplicações em biologia, inclusive na medicina forense. Uma de suas vantagens é que a polimerase amplifica segmentos de DNA confiáveis, mesmo em grandes segmentos (maiores que 2 Kb), fazendo com que essa técnica seja amplamente utilizada na identificação da impressão digital de DNA.

Gabarito: B

Comentários

• a) Realmente 3 ciclos geram 8 cópias de um molde original. Agora esse negócio de metade com comprimentos iguais aos do molde e outra metade com sequência além ficou bem viajado. Talvez a questão tenha tentado confundir com a replicação semiconservativa do DNA, que explica que uma fita da molécula molde original é mantida em cada uma das moléculas-filhas.

  b) A Reverse Transcriptase-PCR (rtPCR) utiliza RNA como molde e a enzima Transcriptase reversa, capaz de sintetizar o chamado DNA complementar (cDNA), que será posteriormente amplificado. 

  c) Acho que são as reações imunoenzimáticas que vêm sendo substituídas pelas moleculares, como a PCR.

  d) Os marcadores STR, por exemplo, tem justamente a vantagem de conseguir amplificar amostras mais degradas pelo curto comprimento do fragmento de análise.

  e) Eu acho, e somente acho, que quanto maiores os segmentos, menos confiável fica a amplificação, por motivos óbvios de proporção erros por quantidade.

• Erro da A) Realmente 3 ciclos vão produzir 8 cópias da sequência alvo de DNA, sendo 2 cadeias duplas contendo o comprimento exato do segmento que se deseja amplificar e as outras 6 contendo DNA extra além da sequência desejada

• Saiba porque a letra E está errada:

  Uma das limitações da Taq Polimerase é que ela só amplifica fragmentos menores que 2kb (2.000 pares de base).

   

  Bons estudos. 

• Só eu achei uma viagem essa "b" estar certa? A reação de PCR não pode usar como molde RNA, não é à toa que antes o RNA tem que ser retrotranscrito em DNA por uma enzima retrotranscriptase. Não se obtém cDNA por PCR e sim pela reação de retrotranscrição, que, inclusive, é feita inteiramente na mesma temperatura: não há ciclos.

  
  

  O que ocorre é que atualmente existem kits one-step RT-PCR em que já há a presença da enzima retrotranscriptase e a TAQ polimerase e na mesma reação são feitas as duas etapas. Acho muita falta de ténica falar que a PCR usa RNA.

  
  

  Quanto a letra E, entendo ela não estar plenamente correta (marquei pensando que das piores era a melhor), mas também hoje em dia existem DNA polimerases (Pfu, por exemplo) com mecanismo de correção 3' - 5' que as tornam muito mais fiéis e capazes de sintetizar fragmentos longos de DNA.

  
  

• Quanto à letra A, na realidade os três ciclos de reação produzem dezesseis cópias da sequência alvo de DNA, visto que -para cada fragmento de DNA será formado um novo fragmento (o seu complemento). No primeiro ciclo 4, no segundo 8, no terceiro 16.