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e)
Na PCR (reação em cadeia da polimerase), comumente utilizam-se primers ou iniciadores.
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Gabarito: E
a) A tecnologia de sequenciamento do DNA atualmente utilizada na área forense baseia-se no método químico conhecido como método de Maxam-Gilbert. Errado! O sequenciamento de DNA iniciou-se nas décadas de 70 – 80, com os métodos de degradação química (Maxam e Gilbert) e terminação de cadeia com dideoxinucleotídeos (Sanger). Atualmente, o método de Sanger ainda é utilizado, porém sem escalabilidade, bastante trabalhoso e demorado. Entretanto, foi a partir de 2005 que surgiram as primeiras tecnologias de sequenciamento de DNA conhecidas como NGS (Next Generation Sequencing), permitindo uma nova abordagem de sequenciamento em larga escala (HGS – High throughput sequencing).
b) Comparativamente à PCR (reação em cadeia da polimerase), a técnica de RFLP (restriction fragment length polymorphism) tem sido adotada com maior eficiência na análise forense, porque utiliza menor quantidade de DNA. Errado! Desde sua invenção, o RFLP foi uma técnica amplamente utilizada na ciência forense. Contudo, tornou-se quase obsoleto com o advento de técnicas menos caras e mais simples de serem realizadas tais como a reação em cadeia da polimerase (PCR).
c) A PCR (reação em cadeia da polimerase) em uso na área forense utiliza a enzima de restrição DNA polimerase obtida da bactéria Termophilus aquaticus. Errado! Enzimas de restrição são enzimas que cortam o DNA. As DNAs Polimerases desempenham algumas funções, como a síntese de cadeias polinucleotídicas, revisões e correções de erros durante a síntese do DNA, porém, não desempenham atividade de enzima de restrição.
d) Na PCR (reação em cadeia da polimerase), comumente se utiliza didesoxinucleotídios (ddNTPs). Errado! Didesoxinucleotídios (ddNTPs) são utilizados em uma das técnicas de sequenciamento do DNA. Na PCR se utiliza desoxinucleotídios (dNTPs).
e) Na PCR (reação em cadeia da polimerase), comumente utilizam-se primers ou iniciadores. Correto!
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Segundo Hercules, “A PCR (reação em cadeia da polimerase) (...), o processo da PCR requer quatro componentes obrigatórios: dois primers ou iniciadores (...).". HÉRCULES, Hygino de Carvalho. Medicina Legal, Texto e Atlas. Ed. Atheneu, 2005, pgs: 83.
GABARITO DO PROFESSOR: LETRA E
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Cl2Mg, H2O, Taq, Buffer, dNTP, Primer, DNA a ser analisado. (Kit caseiro) qRCR
Taq gold, H2O, Primer, DNA (kit comercial ) qRCR
SYBR, H2O, PRIMERS, DNA a ser analisado (cDNA) RT-qPCR
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a) O sequenciamento de DNA iniciou-se nas décadas de 70 – 80, com os métodos de degradação química (Maxam e Gilbert) e terminação de cadeia com dideoxinucleotídeos (Sanger). Atualmente, o método de Sanger ainda é utilizado, porém sem escalabilidade, bastante trabalhoso e demorado. Entretanto, foi a partir de 2005 que surgiram as primeiras tecnologias de sequenciamento de DNA conhecidas como NGS (Next Generation Sequencing), permitindo uma nova abordagem de sequenciamento em larga escala (HGS – High throughput sequencing).
b) Desde sua invenção, o RFLP foi uma técnica amplamente utilizada na ciência forense. Contudo, tornou-se quase obsoleto com o advento de técnicas menos caras e mais simples de serem realizadas tais como a reação em cadeia da polimerase (PCR).
c) Enzimas de restrição são enzimas que cortam o DNA. As DNAs Polimerases desempenham algumas funções, como a síntese de cadeias polinucleotídicas, revisões e correções de erros durante a síntese do DNA, porém, não desempenham atividade de enzima de restrição.
d) Didesoxinucleotídios (ddNTPs) são utilizados em uma das técnicas de sequenciamento do DNA. Na PCR se utiliza desoxinucleotídios (dNTPs).