Questão 2750143

• Banca: UPENET/IAUPE
• Órgão: UPE
• Ano: 2017
• Provas: UPENET/IAUPE - 2017 - UPE - Biólogo
• Disciplina: Biologia
• Assuntos: Moléculas, células e tecidos

Para se fazer uma reação em cadeia de polimerase (PCR), o gene de interesse precisa ter sido clonado e amplificado em bactérias, pois é necessário conhecer os primers, que serão utilizados na amplificação do DNA in vitro. O seu laboratório utiliza a PCR convencional e a em tempo real para estudar a carga amostral de vírus do tabaco. No entanto, você precisa validar os primers mediante PCR convencional. No seu primeiro experimento, houve contaminação do controle negativo e o aparecimento de bandas inespecíficas. No segundo experimento, você obteve sucesso, ao aumentar a temperatura de melting e controlar o uso de reagentes. Agora a PCR em tempo real poderá ser utilizada, reduzindo o tempo de investigação. Sobre isso, analise as proposições a seguir:

I. A sequência e a concentração adequada do iniciador são primordiais para a especificidade e eficiência da PCR, se ele for mal concebido poderá resultar em pouco ou nenhum produto, por causa de amplificação inespecífica, bem como a formação de dímeros de iniciadores.

II. Na PCR convencional, pode ocorrer contaminação por transferência de reagentes, dispositivos de pipetagem, superfícies de laboratório, material biológico dos próprios pesquisadores, ocasionando resultados falsos.

III. A temperatura de melting (Tm) de uma molécula de DNA, na qual metade das moléculas é de cadeia simples e a outra de cadeia dupla, independe do seu tamanho, porém depende da composição de nucleotídeos, visto que produtos amplificados ricos em guanina e citosina precisam de menor Tm, visto terem apenas duas pontes de hidrogênio e, por isso, é mais fácil haver desnaturação e renaturação.

IV. A PCR em tempo real permite a amplificação, detecção e quantificação do DNA em duas etapas, minimiza o risco de contaminação, contudo confere menor precisão e reprodutibilidade, quando comparada à PCR convencional.

Estão CORRETAS, apenas,

• A. I e II.
• B. I, III e IV.
• C. II e III.
• D. II, III e IV.
• E. III e IV.

Gabarito: A

Comentários

• Acredito que o erro da alternativa III- foi afirmar que a cadeia de molécula INDEPENDEM DO TAMANHO. Já o erro da alternativa IV- posso afirmar com toda certeza que foi dizer que o PCR em tempo real envolve DUAS ETAPAS, quando na verdade envolve apenas uma.

• I. A sequência e a concentração adequada do iniciador são primordiais para a especificidade e eficiência da PCR, se ele for mal concebido poderá resultar em pouco ou nenhum produto, por causa de amplificação inespecífica, bem como a formação de dímeros de iniciadores. CERTA

  II. Na PCR convencional, pode ocorrer contaminação por transferência de reagentes, dispositivos de pipetagem, superfícies de laboratório, material biológico dos próprios pesquisadores, ocasionando resultados falsos. CERTA

  III. A temperatura de melting (Tm) de uma molécula de DNA, na qual metade das moléculas é de cadeia simples e a outra de cadeia dupla, independe do seu tamanho, porém depende da composição de nucleotídeos, visto que produtos amplificados ricos em guanina e citosina precisam de menor Tm, visto terem apenas duas pontes de hidrogênio e, por isso, é mais fácil haver desnaturação e renaturação. ERRADA - G e C precisam de maior Tm, apresentam três pontes de hidrogênio.

  IV. A PCR em tempo real permite a amplificação, detecção e quantificação do DNA em duas etapas, minimiza o risco de contaminação, contudo confere menor precisão e reprodutibilidade, quando comparada à PCR convencional. ERRADA

• III - ERRADA pois Guanina e Citosina possuem 3 pontes de H+

  IV - ERRADA pois as etapas para a replicação de DNA são 3 assim como na PCR convencional (Desnaturação - Anelamento - Amplificação). E além desse erro, o PCR em tempo real mostra em exatidão através da geração de luminosidade a quantidade de DNA amplificado logo excluindo o fato que esse teste confere menor reprodutibilidade

• I. A sequência e a concentração adequada do iniciador são primordiais para a especificidade e eficiência da PCR, se ele for mal concebido poderá resultar em pouco ou nenhum produto, por causa de amplificação inespecífica, bem como a formação de dímeros de iniciadores. CORRETA

  II. Na PCR convencional, pode ocorrer contaminação por transferência de reagentes, dispositivos de pipetagem, superfícies de laboratório, material biológico dos próprios pesquisadores, ocasionando resultados falsos. CORRETA

  III. A temperatura de melting (Tm) de uma molécula de DNA, na qual metade das moléculas é de cadeia simples e a outra de cadeia dupla, independe do seu tamanho, porém depende da composição de nucleotídeos, visto que produtos amplificados ricos em guanina e citosina precisam de menor Tm, visto terem apenas duas pontes de hidrogênio e, por isso, é mais fácil haver desnaturação e renaturação. INCORRETA. A Tm leva em consideração o tamanho dos primers e o conteúdo de citosina-guanina, além disso, a ligação citosina-guanina possui três ligações de hidrogênio

  IV. A PCR em tempo real permite a amplificação, detecção e quantificação do DNA em duas etapas, minimiza o risco de contaminação, contudo confere menor precisão e reprodutibilidade, quando comparada à PCR convencional. INCORRETA. Confere maior precisão e reprodutibilidade