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Alternativa C
O procedimento de PCR envolve três etapas, cada uma repetida muitas vezes.
Desnaturação
O DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimento a cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta (desnaturada), tornando-se uma fita única.
Anelamento ou hibridização
Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada. Ou seja, um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita. O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C.
Extensão e Polimerização
Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase adiciona as bases complementares, formando uma nova fita e então tem-se novamente a duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72°C.
Fonte: kasvi.com.br/3-etapas-pcr
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Gabarito C.
Existem três fases básicas ou ciclos para cada reação de PCR. Cada ciclo contém um ou mais passos e duas variáveis em cada passo: a temperatura e a duração.
Etapa de desnaturação inicial: consiste de um único passo de desnaturação a 94ºC por 5 minutos. Dificilmente altera-se esta etapa. O bojo da PCR toma local neste ciclo, que é subdividido em três:
1)Etapa de anelamento: este é o passo que habilita os primers a anelar a fita simples desnaturada. O tempo necessário para anelamento é de 30-45 segundos.
2) Etapa de extensão: É neste passo que a Taq polimerase age para estender o molde. Regularmente ela é realizada a temperatura de 72º (a atividade enzimática ótima é de 76 - 79ºC), dificilmente altera-se a temperatura de 72º.
3) Etapa de desnaturação: A desnaturação da molécula de DNA formado serve como molde para o próximo ciclo. Ela é realizada a temperatura de 93-94ºC. Nesta temperatura a enzima tem uma meia vida de cerca de 1 hora.
Estes três passos são repetidos 30-40 vezes em particular para análises de digestão. Se os ciclos excederem esta
quantidade eles poderão introduzir mutações com a Taq polimerase.
Fonte: http://depto.icb.ufmg.br/dmor/pad-morf/pcr2.htm
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Essa questão aborda a técnica de PCR em uma reação, e pede o que ocorre
na etapa chamada de anelamento. A técnica de PCR permite amplificar um único
fragmento de DNA por milhares de vezes em poucas horas, podendo obter cópias de
parte do DNA que seja possível detectar um objeto de estudo. A reação de PCR
possui algumas etapas que devem ser seguidas para que as cópias apresentem uma
sequência correta.
Extração: extrair o material genético por meio de aquecimento até ser
desnaturada.
Desnaturação: adição de base nitrogenada e polimerase (enzima), aquecimento com
temperatura de 95° para separação das fitas, e resfriamento, com temperatura de
50°.
Anelamento: união das fitas de DNA (primers) nos lados complementares e
amplificação da nova molécula.
Polimerização: extensão definitiva do DNA com a enzima adicionando as bases
nitrogenadas. (Conheça os princípios da técnica de PCR e suas etapas.2018.
Disponível em https://www.prolab.com.br/blog/equipamentos-aplica....
Acesso em junho de 2021)
Fonte da imagem: site kasvi.com.br
Na etapa de anelamento, ocorre
A) o aumento de temperatura em relação à
etapa de desnaturação. O aumento da temperatura ocorre na etapa da
desnaturação e extração, e não no anelamento. Incorreta.
B) a perda da estrutura dupla hélice do
DNA, transformando-se em fita simples. A separação das fitas ocorre na
etapa da desnaturação, onde as fitas se tornam simples. Incorreta.
C) o pareamento dos primers na região
alvo de amplificação. Na etapa do anelamento, ocorre o pareamento dos
primes em cada lado complementar da região alvo. CORRETA.
D) a formação de novas fitas de DNA dupla hélice. Essa formação das novas
ficas ocorre na etapa da polimerização, última da reação da PCR. Incorreta.
E) a utilização dos dNTP's para a síntese de novas fitas de DNA. A
utilização dessa base de nucleotídeos (3 fosfato) ocorre na desnaturação e não no
anelamento. Incorreta.
Gabarito do Professor: Letra C.