Primeira etapa - Desnaturação: Acontece a 96°C. Aquece fortemente a reação para separar, ou desnaturar, as fitas de DNA. Isso proporciona um molde de fita simples para a próxima etapa.
Segunda etapa - Anelamento: Também pode ser chamado de hibridização ou emparelhamento. Resfria a reação, 55-65°C, para que os primers possam se ligar em suas sequencias complementares no DNA molde de fita simples.
Terceira etapa - Extensão: Ocorre em uma temperatura em torno de 72°C. Nessa etapa a temperatura é aumentada para que a Taq polimerase estenda os primers e sintetize novas fitas de DNA.
OBS: O resultado do primeiro ciclo é a duplicação do número de moléculas do DNA. O Ciclo se repete entre 25 e 35 vezes.
Essa questão aborda a identificação de um indivíduo
através da Reação em cadeia da polimerase PCR, e pede que assinale como
verdadeiras ou falsas as opções listadas no enunciado. A reação em cadeia de
polimerase (PCR) se trata de uma técnica utilizada pela biologia molecular que
amplifica uma ou algumas cópias de um pedaço de DNA, com base na replicação do material
genético. Essa técnica ocorre em três etapas: desnaturação, anelamento e
extensão (ou polimerização). Na desnaturação, a sequência do DNA a ser replicada
é aquecida por aproximadamente 30s e 95°C para sua desnaturação, se tornando
uma única fita. No anelamento, os primers realizam o complemento de fita oposta
da sequência de DNA com o molde sendo determinado pela posição dos iniciadores
que se anelarem a fita. Na extensão, a enzima DNA-polimerase inclui bases
complementares e forma uma nova fita, para novamente ocorrer a duplicação do
DNA. Cada etapa acontece em uma temperatura específica e para uma amplificação
efetiva, são realizados cerca de 20 a 30 ciclos de reação. (Linhares, S. &
Gewandsznajder, F. Biologia. 1ª ed.
São Paulo: Ática, 2011)
Fonte da imagem: site kasvi.com.br
Analisando as opções citadas:
( V ) Na PCR, a reação é repetida
ciclicamente através de uma série de alterações de temperatura, o que
possibilita a produção de muitas cópias da região de interesse. Essa técnica
repete a reação em ciclos com alterações de temperatura, produzindo muitas
cópias. VERDADEIRA.
( V ) Reação em Cadeia da
Polimerase é uma técnica utilizada diariamente nos laboratórios e possibilita
a amplificação de um dado fragmento da amostra de DNA inicial, de forma
exponencial. É uma técnica muito utilizada em laboratórios, que
possibilita essa amplificação de uma amostra de DNA inicial. VERDADEIRA.
( V ) O ciclo de PCR consiste
em três etapas principais: desnaturação (separação da dupla fita de DNA),
emparelhamento (iniciadores determinam a região a ser copiada) e extensão (conhecida
como alongamento, em que a enzima taq polimerase complementa a fita, formando
novamente uma dupla fita). Esses são os ciclos da
reação em cadeia da polimerase, que forma novamente uma dupla fita no final de
um ciclo com o auxílio da enzima DNA-polimerase (Taq Pol). VERDADEIRA.
A sequência correta
é:
A) F – F – F. Nenhuma das opções
citadas é falsa. Incorreta.
B) V – F – V. A segunda opção
do enunciado é verdadeira, e não falsa. Incorreta.
C) F – V – F. A primeira e a
terceira opção são verdadeiras, e não falsas. Incorreta.
D) V – V – V. As três opções citadas
no enunciado são verdadeiras sobre a reação em cadeia da polimerase. CORRETA.
E) V – V – F. A terceira opção
citada é verdadeira, e não falsa. Incorreta.
Gabarito do Professor: Letra D.
Essa questão aborda a identificação de um indivíduo
através da Reação em cadeia da polimerase PCR, e pede que assinale como
verdadeiras ou falsas as opções listadas no enunciado. A reação em cadeia de
polimerase (PCR) se trata de uma técnica utilizada pela biologia molecular que
amplifica uma ou algumas cópias de um pedaço de DNA, com base na replicação do material
genético. Essa técnica ocorre em três etapas: desnaturação, anelamento e
extensão (ou polimerização). Na desnaturação, a sequência do DNA a ser replicada
é aquecida por aproximadamente 30s e 95°C para sua desnaturação, se tornando
uma única fita. No anelamento, os primers realizam o complemento de fita oposta
da sequência de DNA com o molde sendo determinado pela posição dos iniciadores
que se anelarem a fita. Na extensão, a enzima DNA-polimerase inclui bases
complementares e forma uma nova fita, para novamente ocorrer a duplicação do
DNA. Cada etapa acontece em uma temperatura específica e para uma amplificação
efetiva, são realizados cerca de 20 a 30 ciclos de reação. (Linhares, S. &
Gewandsznajder, F. Biologia. 1ª ed.
São Paulo: Ática, 2011)
( V ) Na PCR, a reação é repetida
ciclicamente através de uma série de alterações de temperatura, o que
possibilita a produção de muitas cópias da região de interesse. Essa técnica
repete a reação em ciclos com alterações de temperatura, produzindo muitas
cópias. VERDADEIRA.
( V ) Reação em Cadeia da
Polimerase é uma técnica utilizada diariamente nos laboratórios e possibilita
a amplificação de um dado fragmento da amostra de DNA inicial, de forma
exponencial. É uma técnica muito utilizada em laboratórios, que
possibilita essa amplificação de uma amostra de DNA inicial. VERDADEIRA.
( V ) O ciclo de PCR consiste
em três etapas principais: desnaturação (separação da dupla fita de DNA),
emparelhamento (iniciadores determinam a região a ser copiada) e extensão (conhecida
como alongamento, em que a enzima taq polimerase complementa a fita, formando
novamente uma dupla fita). Esses são os ciclos da
reação em cadeia da polimerase, que forma novamente uma dupla fita no final de
um ciclo com o auxílio da enzima DNA-polimerase (Taq Pol). VERDADEIRA.
A sequência correta
é:
A) F – F – F. Nenhuma das opções
citadas é falsa. Incorreta.
B) V – F – V. A segunda opção
do enunciado é verdadeira, e não falsa. Incorreta.
C) F – V – F. A primeira e a
terceira opção são verdadeiras, e não falsas. Incorreta.
D) V – V – V. As três opções citadas
no enunciado são verdadeiras sobre a reação em cadeia da polimerase. CORRETA.
E) V – V – F. A terceira opção
citada é verdadeira, e não falsa. Incorreta.
Gabarito do Professor: D