O EMIT é baseado na competição entre antígenos solúveis na amostra e antígenos marcados provenientes do teste.
É adicionado o anticorpo específico para o antígeno que se deseja medir, quando houver antígeno alvo já presente na amostra o anticorpo irá se ligar impedindo sua posterior ligação ao antígeno marcado e consequente inibição da atividade enzimática.
Quando não houver antígeno alvo na amostra, o anticorpo fica livre para se ligar ao antígeno marcado e impedir sua atividade.
Resumindo: Quanto maior a concentração do antígeno alvo na amostra, maior a atividade enzimática, visto que essa fica livre da interação com o anticorpo.