Tipicamente, amostras podem ser tomadas, tanto de um tecido biológico quanto de uma cultura de células. As amostras são resfriadas ou aquecidas rapidamente. Elas são homogenizadas por sonicação (quebra das células por ondas sonoras de alta freqüência) ou por força mecânica. O resultante é a mistura homogênea dos componentes da célula, e pode ser usado da forma que está ou sujeita a centrifugação em uma série de passos para se isolar as frações do material citosóico (material do interior da célula externo ao seu núcleo) e nuclear. Na amostra preparada é então quantificada, para que uma quantidade consistente de proteína possa ser retirada de cada amostra diferente.
As amostras são fervidas de um a cinco minutos em uma solução tampão, contendo corante, um composto sulfuroso e um detergente conhecido como dodecil sulfato de sódio (SDS). A ebulinação e o detergente desnaturam a proteína, desenovelando-a completamente. O SDS então cerca a proteína, deixando-a coberta por uma carga negativa, e o enxofre impede a formação de pontes de dissulfeto na proteína.
O advento da técnica
de Western blotting, na década de 70,
possibilitou que proteínas separadas pela eletroforese fossem detectadas,
caracterizadas e quantificadas. Western blotting é um excelente método em biologia molecular que permite detectar uma
proteína em um homogenato de tecido biológico, dando também informação acerca
do seu tamanho. Inicialmente, utiliza-se a eletroforese em gel de acrilamida
para separar as proteínas de acordo com o peso molecular que, posteriormente,
são transferidas para uma membrana de nitrocelulose para o uso de anticorpos
específicos à proteína de interesse.
Alternativa
correta: Errado