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ID
2904952
Banca
INSTITUTO AOCP
Órgão
ITEP - RN
Ano
2018
Provas
Disciplina
Biologia
Assuntos

Considerando as técnicas de sequenciamento do DNA, a respeito das características desse tipo de procedimento, assinale a alternativa correta.

Alternativas
Comentários
  • Alternativa D

    São separados por eletroforese e submetidos a radiografia

  • Gabarito D.

    a) Os ddNTPs são desprovidos de do grupo 3-hidroxila e por isso quando adicionados a uma fita em crescimento impedem que esta continue a se replicar;

    b) O método Sanger é um método tradicional de sequenciamento de DNA;

    c) Na reação, a presença de ddNTPs não dispensa a adição de desonucleotídeos trifosfatos normais. Ambos são adicionados para que a reação possa ocorrer, sendo a concentração dos ddNTPs menor que a concentração dos dNTPs;

    d) correta;

    e) O pirosequenciamento é uma nova técnica da Biologia Molecular, na qual a síntese de DNA ocorre através de um complexo de reações que inclui enzimas (ATP sulfurilase e luciferase) e substratos (adenosina 5’ fosfossulfato e luciferina). O grupo pirofosfato, liberado durante a adição de um nucleotídeo, resulta na produção de luz detectável. Portanto, quando um novo nucleotídeo é incorporado em uma cadeia crescente de DNA através da DNA polimerase, pirofosfato é gerado de maneira estequiométrica, resultando na produção de ATP. O ATP produzido leva à conversão enzimática da luciferase com emissão de fótons. 

  • A questão pede a alternativa correta em relação às técnicas de sequenciamento do DNA e suas características. O sequenciamento de DNA é um processo para determinar a sequência de bases (nucleotídeos) em um pedaço de uma molécula de DNA, sendo possível conhecer a sequência de bases nucleotídicas (A, G, C, T) dentro do ácido nucleico. Esse procedimento ocorre quebrando o DNA em pequenos fragmentos, sequenciando esses pedaços e montando sequências em uma única nova sequência. O método de sequenciamento de Frederick Sanger (método enzimático ou de Sanger) é um dos mais utilizados até hoje, e consiste em adicionar didesoxiribonucleotídeos (ddNTP's), nucleotídeos modificados que não possuem o grupo OH livre no carbono 3' pentose, para que quando os ddNTP's tentem se ligar com a fita de DNA, o nucleotídeo mais próximo não tenha onde se conectar sem o grupo OH, parando a replicação e sendo possível obter fitas do mesmo DNA com número diferente. No final da replicação, resultam fragmentos de diferentes tamanhos da fita de DNA que são aplicados em gel de poliacrilamida e separados em eletroforese. Nesse método ocorrem quatro diferentes reações correspondentes aos didesoxinucleotídeos das bases A, C, G e T, terminando a sequência de DNA quando incorporados, sendo o oposto do que ocorre no desoxinucleotídeo normal.


    Fonte da imagem: site biometrix.com.br

    Em cada tubo de reação de sequenciamento no método de Sanger temos:
    • Um molde de DNA para sequenciar
    • A sequência do iniciador (primer)
    • DNA-polimerase (enzima)
    • Os quatro desoxinucleotídeos trifosfatos (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
    • Um didesoxinucleotídeo trifosfato marcado radiotivamente ou por um corante fluorescente
    • O primer ou iniciador marcado é adicionado ao DNA unifilamentar cuja sequência é desconhecida.
    • A enzima DNA-polimerase adiciona bases livres ao DNA unifilamentar, usando o pareamento de bases complementares. (Sequenciamento de DNA: Desvendando o código da vida. Disponível em https://www.biometrix.com.br/sequenciamento-dna-de.... Acesso em junho de 2021; Borges, Júlio C. Sequenciamento de DNA e suas aplicações. Disponível em https://edisciplinas.usp.br/pluginfile.php/2346804.... Acesso em junho de 2021)


    Assinale a alternativa correta. 


    A) O método de dideoxinucleotídeos utiliza o grupo 3-hidroxila. Esse método de adicionar didesoxiribonucleotídeos NÃO utiliza o grupo 3-hidroxila. Incorreta.

    B) O método Sanger também é conhecido como sequenciamento de nova geração. Esse método é o tradicional que realiza o sequenciamento, o método de sequenciamento de nova geração é o mais recente, também conhecido como
    Next-Generation Sequencing (NGS). Incorreta.

    C) A presença de ddNTPs na reação dispensa a adição de desoxinucleotídeos trifosfato normais. Os ddNTPs não dispensam a adição dos desoxinucleotídeos normais, uma vez que eles também participam do processo de sequenciamento de Sanger. Incorreta.


    D) Os fragmentos resultantes são separados eletroforeticamente e submetidos à autorradiografia. No final do sequenciamento, os fragmentos que resultaram são separados por eletroforese e analisadas por autorradiografia para serem lidos. CORRETA.


    E) A utilização de vetores plasmidiais, em técnicas de subclonagem de fragmentos de DNA, é denominada “pirossequenciamento". O pirosequenciamento consiste em uma nova técnica da Biologia Molecular onde a síntese de DNA acontece por reações e substratos, não utiliza vetores plasmidiais (DNA em forma de plasmídeos). Incorreta.

    Gabarito do Professor: Letra D.

  • e) A utilização de vetores plasmidiais, em técnicas de subclonagem de fragmentos de DNA, é denominada “shotgun”.