As duas técnicas mais importantes para o sequenciamento de DNA são o método químico de
degradação de bases desenvolvido por Allan Maxam e Walter Gilbert em 1977 e o método didesoxi
ou terminação da cadeia de Fred Sanger e colaboradores em 1978.
Os dois métodos são baseados na produção de um conjunto de fitas simples de DNA que são
separadas pelo princípio de eletroforese (Okubo et al., 1992).Se comparado ao sequenciamento de
Maxam e Gilbert, o método de terminação da cadeia de Sanger gera dados que são mais facilmente
interpretados. Por isso, essa tem sido a técnica mais utilizada em Projetos Genoma (Sterky &
Lundeberg, 2000).
Aquivo em pdf: http://genfis40.esalq.usp.br/multi/index.php?option=com_phocadownload&view=category&download=4:sequenciamento&id=3:sequenciamento&Itemid=62
A questão aborda duas técnicas importantes para o sequenciamento de DNA,
baseados na produção de fitas simples de DNA separadas por eletroforese, que
foram desenvolvidos por Maxam e Gilbert (1977) e por Sanger e outros (1978),
pedindo-se o nome desses métodos que preencham corretamente as lacunas. O
sequenciamento do DNA é a ordem dos nucleotídeos (Adenina, Citosina, Timina e
Guanina) ao longo da dupla fita. O primeiro método de sequenciamento desenvolvido
em 1977 foi utilizado e aplicado nesse período, através da degradação química
do DNA, que se constitui de fragmentos de DNA clivados e separados em gel de
acordo com seu tamanho. Em 1978, Sanger propôs um método diferente e mais
eficiente, que utiliza o sequenciamento enzimático didesoxi término de cadeia, que determina a sequência
utilizando a enzima DNA polimerase e didesoxinucleotídeos (ddNTPs), análogos
dos desoxirribonucleotídeos (dNTPs), misturando em uma reação de PCR. Esse
método é altamente aplicável e até hoje é o método mais utilizado. (Sequenciamento de DNA e suas aplicações. Disponível
em https://edisciplinas.usp.br/pluginfile.php/2346804....Acesso em julho de 2021; Sequenciamento
de DNA. Disponível em https://moodle.ufsc.br/pluginfile.php/1391254/mod_....
Acesso em julho de 2021)
Preenchendo
corretamente as lacunas do enunciado, temos:
As duas
técnicas mais importantes para o sequenciamento de DNA são o método químico
de degradação de bases desenvolvido por Allan Maxam e Walter Gilbert, em
1977, e o método de sequenciamento enzimático didesoxi término de cadeia de
Fred Sanger e colaboradores, de 1978.
Fonte das imagens: site ufsc.br
Preencha as lacunas e assinale a
alternativa correta.
A) físico de degradação / desoxi ou
terminação de cadeia. O primeiro método foi o químico, e não físico, através
da degradação do DNA; e o segundo método foi o didesoxi, e não desoxi, com
terminação de cadeia. Incorreta.
B) químico de degradação de bases /
didesoxi ou terminação de cadeia. O primeiro foi o método químico de
degradação de bases de nucleotídeos, e o segundo método foi o didesoxi (utiliza
ddNTPs) ou terminação de cadeia. CORRETA.
C) químico de depleção de bases /
didesoxi ou terminação de cadeia. O primeiro método foi o químico de
degradação de bases, e não depleção; e o segundo método foi o didesoxi, com
terminação de cadeia. Incorreta.
D) físico de depleção de bases / desoxi
ou terminação de cadeia. O primeiro método foi o químico, e não físico, através
da degradação do DNA e não da depleção; e o segundo método foi o didesoxi, e
não desoxi, com terminação de cadeia. Incorreta.
E) físico de depleção de bases /
didesoxi de iniciação de cadeia. O primeiro método foi o químico, e não
físico, através da degradação do DNA, e não depleção; e o segundo método foi o
didesoxi, porém de término de cadeia. Incorreta.
Gabarito do Professor: Letra B.