O mínimo exigido pelos compêndios oficiais é que se empreguem pelo menos dois tipos de meio de cultura:
*O caldo tioglicolato, que propicia o crescimento de uma ampla variedade de microrganismos fastidiosos, sejam aeróbicos, anaeróbicos ou microaerófilos. O tioglicolato de sódio presente na formulação é responsável por diminuir o potencial de óxido - redução do meio e neutralizar o efeito antibacteriano de conservantes mercuriais, se presentes no material a ser analisado. O indicador resazurina indica o estado de oxidação ou aerobiose.
*O caldo caseína soja é um meio completo que permite o crescimento de bactérias aeróbicas e fungos. Os compêndios oficiais mencionam duas condições diferentes como temperaturas de incubação, variando de 30 a 35°C para o meio tioglicolato e de 20 a 25°C para o caldo caseína soja.
O ensaio é acompanhado durante 14 dias. Como para qualquer outro ensaio microbiológico, faz-se necessário comprovar a capacidade promotora de crescimento dos meios de cultura utilizados, o que deve ser verificado, pelo menos, a cada lote. Para isso, inocula-se pequena quantidade (10 a 100UFC) dos microrganismos indicados nos compêndios oficiais e incuba-se nas temperaturas adequadas durante 3 (bactérias) ou 5 dias (fungos). O crescimento dos microrganismos indica que o meio de cultura está adequado. Além disso, é necessário comprovar a esterilidade dos meios utilizados. Para isso, incuba-se os meios de cultura, prontos e esterilizados, pelo período de 14 dias. A não turvação dos mesmos indica que a esterilização foi eficiente.