O procedimento a seguir é descrito na Farmacopeia Brasileira, 5ª edição (Anvisa, 2010) para a avaliação de substâncias relacionadas na monografia de Varfarina matéria prima .
Substâncias relacionadas. Proceder conforme descrito em Cromatografia em camada delgada (5.2.17.1), utilizando sílica-gel GF254, como suporte, e mistura de ácido acético glacial, cloreto de metileno e cicloexano (20:50:50) como fase móvel. Aplicar, separadamente, à placa, 20 μL de cada uma das soluções, recentemente preparadas, descritas a seguir.
Solução (1): dissolver 0,20 g da amostra em acetona e diluir para 10 mL com o mesmo solvente.
Solução (2): diluir 2 mL da Solução (1) em 10 mL de acetona.
Solução (3): diluir 1 mL da Solução (2) em 200 mL de acetona.
Solução (4): dissolver 40 mg de varfarina SQR em acetona e diluir para 10 mL com o mesmo solvente.
Solução (5): transferir 10 mg de acenocumarol SQR e 1 mL da Solução (1) para balão volumétrico de 10 mL, diluir com acetona e completar o volume com o mesmo solvente.
Desenvolver o cromatograma. Remover a placa, deixar secar ao ar. Examinar os
cromatrogramas obtidos sob luz ultravioleta (254 nm). Qualquer mancha obtida no
cromatograma com a Solução (1), com exceção da mancha principal, não pode ser mais
intensa que a obtida no cromatograma com a Solução (3) (___%). O teste não é válido a
não ser que o cromatograma obtido com a Solução (5) mostre duas manchas claramente
separadas e que a mancha do cromatograma obtida com a Solução (3) seja claramente
visível.
O limite individual de substâncias relacionadas para a Varfarina, em porcentagem, é